PCR Mix

(一)PCR Mix介绍

PCR Mix一般是指配制的PCR的预混液。一般PCR扩增体系包括扩增引物、4 种dNTP、DNA聚合酶、扩增模板(DNA/cDNA) 和PCR 反应缓冲液(buffer)5种基本组分。PCR Mix一般是将除了模板、引物以外其他的组分按照最佳配比混合在一起的混合液,使用时直接加入模板和引物就可以,这样做节省时间,也不用考虑反应体系性能问题。

(二)PCR Mix关键成分

①引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

②酶及其浓度:催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时),浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成产物量减少。

③dNTP的质量与浓度:在PCR反应中,dNTP应为50~200umol/L,一般4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制,dNTP浓度过低会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合,使游离Mg2+浓度降低。

④模板(靶基因)核酸:模板核酸的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一。

⑤Mg2+浓度:Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响,在一般的PCR反应中,各种dNTP浓度为200umol/L时,Mg2+浓度为1.5~2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高,反应特异性降低,出现非特异扩增,浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性,使反应产物减少。

下面的链接对PCR Mix的关键成分进行了说明。https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/cloning/cloning-learning-center/invitrogen-school-of-molecular-biology/pcr-education/pcr-reagents-enzymes/pcr-component-considerations.html

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