一、常用活化生物素应用
1.标记蛋白质氨基的活化生物素：N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）。
2.标记蛋白质醛基的活化生物素：酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BCHZ）。
3.标记蛋白质巯基的活化生物素：3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素（MPB）。
4.标记蛋白质核酸的活化生物素：常用于标记核酸分子的活化生物素有光生物素、生物素脱氧核苷三磷酸、BNHS和BHZ。
二、生物素标记的常识问题
1、活化生物素通过侧链与蛋白分子连接；
2、一个蛋白分子可被多个生物素标记－多价性；
3、对BNHS多标记抗体, BHZ则多标记微酸性抗原；抗原、抗体标记后活性不变；
4、可对标记材料（如酶）标记：碱性磷酸酶标记后活性将降低；
三、生物素标记蛋白质
生物素化蛋白质衍生物的特性生物素化蛋白质衍生物有两类：一种是生物素化的大分子生物活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。
标记注意事项：
1、依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性，选择相应的活化生物素和反应条件；
2、标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例；生物素：IgG 用量比(mg/mg)宜为2:1, IgG应用浓度
0.5~5μg/ml; 生物素1~3个/Ag，3~5个/Ab；
3、为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构；
4、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。
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